elisa試劑盒實驗中的各項操作細(xì)節(jié)
細(xì)節(jié)決定成敗，這對于實驗室科研工作者來說也是如此。在elisa試劑盒實驗中的各項操作細(xì)節(jié)有很多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，加樣時由低濃度向高濃度加，因為這樣可以減少跳孔的幾率。而整個實驗的*后關(guān)鍵就是結(jié)果的處理方法了，那么在在今天的技術(shù)文章中，為您帶來的是ELISA試劑盒檢測結(jié)果分析方法。
①：ELISA實驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
②：平均OD值減去空白孔的OD值。
③：制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條*合適的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度的那條曲線。
如果出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，或平行性不好(雙孔對照孔的OD值差別很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問加入的試劑量不同，相對應(yīng)的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請小心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以保證加入液體體積的一致性。
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